Precauções para eletroforese em gel de poliacrilamida

· PoliacrilamidaO gel deve, por monômero de acrilamida, material de partida de polimerização, catalisador e a direita da mistura de sal e tampão juntos.

· acrilamidae bis (n, n '- metileno dupla acrilamida) é a matriz de gel de monômero.

· Processo de polimerização de adesivo de persulfato de amônio. A formulação da cola requer 10% de solução de persulfato de amônio preparado em água. A maioria das informações indicava a necessidade de uso ativo. No entanto, a solução a 10% pode ser colocada em 4 ℃ por várias semanas sem perda significativa de atividade. Faça até 10 ml e descarte quando a cola falhar em se agregar.

Dica: a porcentagem deacrilamidaNa cola de sequenciamento e cola de proteínas, não é a mesma. Se estiver usando acrilamida pré -fabricada: BIS Solution, certifique -se de obter a garrafa certa.

· Temed (n, n, n ', n'- tetrametil etilenodiamina) é um catalisador, em uma garrafa marrom, colocada na geladeira. Adicione antes de derramar cola.

· A eletroforese de poliacrilamida utilizada em eletroforese deve ser lavada antes e depois de cada vez. Após a eletroforese, lave com uma escova macia e um pano em água com sabão quente, enxágue com água destilada e fique de pé para secar.

· A umidade e poeira podem causar com polímero oco. Antes da eletroforese, limpe a placa de vidro com limpador de vidro e limpe -a com uma escova macia. Lave com água destilada e seque bem com uma limpeza de papel. Enxágue com etanol a 70% antes de limpar com papel ajuda a limpar e acelerar a secagem. Adicione amostras de acrilamida sucessivamente: bis, água, solução tampão, persulfato de amônio, Temed. Agite bem e despeje imediatamente.

Não é necessário para a poliacrilamida degass antes da polimerização. (A acrilamida costumava ser colocada no vácuo para remover bolhas porque o oxigênio inibe a polimerização.)

Dicas de amostra de ponto de cola horizontal.

· Coloque um pedaço de papel preto na caixa inferior, fundo preto para fazer algum orifício de amostra para ver com mais clareza.
· Cole o tampão cheio de tanques, logo acima do colóide.
· Se a borda tiver uma luz, acenda as luzes, deixe a luz brilhar o colóide. Desenhe a amostra na pipeta.
· Usando o dispositivo de pipeta automática.
· Em 10-200 MU 1, o ponto de movimentação líquido pode ser usado na maioria dos pontos da amostra. Para orifícios de amostra muito pequenos (menos de 10μ1), a cabeça de pipeta longa usada para a cola de sequenciamento é mais conveniente.

· Pipetagem imersa na amostra, inalando o fluido de movimento lentamente. A amostra pode parecer pegajosa com glicerina, e o bombeamento rápido pode desenhar bolhas de ar na cabeça da pipeta.

· Amostras Após inalar a cabeça da pipeta, moverá a cabeça do fluido suavemente na borda do tubo ou limpeza de papel sugar a cabeça líquida para fora das gotículas. Cuidado para não sugar a amostra.

Coloque a amostra no buraco da amostra

· Dispositivo de pipetagem para manter um pouco de pressão, faça as amostras mover ligeiramente o excesso de cabeça líquida.
· A cabeça da pipeta inserida no buffer, um pouco mais alta que os orifícios do ponto, mantém pressão positiva. A ponta da pipeta pode ser inserida em um pequeno orifício.
· Lenta e firmemente as amostras para fora. A ponta da pipeta é colocada acima do orifício da amostra de ponto e a amostra afundará no orifício. Deixe a amostra afundar para preencher o orifício da amostra em vez de empurrar.
· Depois que a última gota da amostra com a cabeça líquida, o líquido se moverá para a segunda perna, elevar lentamente o movimento líquido, saia do buffer

Como fazer amostragem de cola vertical?

· Buracos de amostra de ponto de cola vertical formados entre dois pedaços de vidro. Em cola muito fina, a cabeça da pipeta nem pode ser inserida entre duas placas de vidro. Assista a glicerina! Coloque a cabeça da pipeta sobre o orifício da amostra e a amostra afundará no orifício.
· Amostra de ponto antes, certifique -se de colocar o ponto vertical do orifício da amostra de gel de polipropileno acil está limpo. Lave a acrilamida não polimerizada e a água que pode aparecer na parte inferior do orifício da amostra. A água pode tornar o orifício da amostra significativamente menor. Use uma seringa de 25 ml ou 50 ml e uma agulha de calibre 18. Despeje o tampão de eletroforese e lave cuidadosamente o orifício da amostra.
· Pode ser difícil ver o orifício da amostra, mas, ao mesmo tempo, o restante é fácil. Se houver excesso de orifícios, o buffer de amostra poderá ser testado com azul de bromofenol.