Precauções para eletroforese em gel de poliacrilamida

· poliacrilamidao gel deve ser composto por monômero de acrilamida, material de partida de polimerização, catalisador e o direito de mistura de sal e tampão juntos.

· acrilamidae BIS (N,N'-metileno dupla acrilamida) é a matriz de gel em forma de monômero.

· persulfato de amônio inicia processo de polimerização adesiva.A formulação da cola requer solução de persulfato de amônio a 10% preparada em água.A maior parte das informações indicou a necessidade de uso ativo.No entanto, a solução a 10% pode ser colocada a 4°C durante várias semanas sem perda significativa de atividade.Fazer até 10 ml e descartar quando a cola não agregar.

Dica: A porcentagem deacrilamidano sequenciamento, cola e cola de proteína não são a mesma coisa.Se estiver usando acrilamida pré-fabricada: solução BIS, certifique-se de obter o frasco certo.

· TEMED (N, N, N', N'-tetrametiletilenodiamina) é um catalisador, em frasco marrom, colocado na geladeira.Adicione antes de derramar a cola.

· eletroforese de poliacrilamida vidro usado em eletroforese deve ser lavado antes e depois de cada vez.Após a eletroforese, lave com escova macia e pano em água quente com sabão, enxágue com água destilada e deixe secar.

· umidade e poeira podem causar polímeros ocos.Antes da eletroforese, limpe a placa de vidro com limpador de vidros e limpe-a com uma escova macia.Lave com água destilada e seque bem com papel toalha.Enxaguar com etanol 70% antes de passar papel ajuda a limpar e acelerar a secagem.Adicionar amostras de acrilamida sucessivamente: BIS, água, solução tampão, persulfato de amônio, TEMED.Agite bem e despeje imediatamente.

Não é necessário desgaseificar a poliacrilamida antes da polimerização.(A acrilamida costumava ser colocada no vácuo para remover bolhas porque o oxigênio inibe a polimerização.)

Pontas de amostra com ponto de cola horizontal.

· coloque um pedaço de papel preto na caixa de baixo, fundo preto para fazer um furo de amostra para ver mais claramente.
· tampão cheio de tanque de cola, logo acima do colóide.
· se a borda tiver luz, acenda as luzes, deixe a luz brilhar coloidal.Desenhe a amostra na pipeta.
· utilizando dispositivo de pipetagem automático.
· em 10-200 mu 1 ponto móvel de líquido pode ser usado na maioria dos pontos da amostra.Para furos de amostra muito pequenos (menos de 10 μ1), a cabeça longa da pipeta usada para sequenciar a cola é mais conveniente.

· pipetar apenas imerso na amostra, inalando fluido em movimento lento.A amostra pode parecer pegajosa com glicerina e o bombeamento rápido pode atrair bolhas de ar para a cabeça da pipeta.

· amostras após inalar a cabeça de pipetagem, moverá a cabeça do fluido suavemente na borda do tubo ou limpará a cabeça do líquido com papel para fora das gotículas.Tenha cuidado para não sugar a amostra.

Coloque a amostra no orifício da amostra

· dispositivo de pipetagem para manter um pouco de pressão, fazer com que as amostras se movam levemente, transbordando a cabeça do líquido.
· a cabeça de pipetagem inserida no tampão, ligeiramente acima dos orifícios pontuais, mantém pressão positiva.A ponta da pipeta pode ser inserida em um pequeno orifício.
· lenta e continuamente as amostras são retiradas.A ponta da pipeta é colocada acima do orifício pontual da amostra e a amostra afundará no orifício.Deixe a amostra afundar para preencher o orifício da amostra em vez de empurrá-la para dentro.
· uma vez que a última gota de amostra com cabeça de líquido, o líquido se moverá para a segunda perna, levante lentamente o líquido, mova-se para fora do buffer

Como fazer amostragem de cola vertical?

· Furos de amostra com ponto de cola vertical formados entre duas peças de vidro.Na cola muito fina, a cabeça da pipeta não pode sequer ser inserida entre duas placas de vidro.Cuidado com a glicerina!Coloque a cabeça da pipeta sobre o orifício da amostra e a amostra afundará no orifício.
· ponto de amostra antes, certifique-se de colocar o ponto vertical do orifício da amostra de polipropileno acil gel é enxaguado e limpo.Lave a acrilamida não polimerizada e a água que pode aparecer no fundo do orifício da amostra.A água pode tornar o orifício da amostra significativamente menor.Use uma seringa de 25ml ou 50ml e uma agulha de calibre 18.Despeje o tampão de eletroforese e lave cuidadosamente o orifício da amostra.
· pode ser difícil ver o furo da amostra, mas ao mesmo tempo o resto é fácil.Se houver furos em excesso, o tampão de amostra pode ser testado com azul de bromofenol.